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深層過濾器利用具有一定厚度的特定介質(zhì)（就像海綿），去除顆粒、亞微顆粒、膠質(zhì)物以及可溶的物質(zhì)，從而地去除污染物。流體必須通過彎曲的路徑才能到達(dá)另一側(cè)。圖1顯示了介質(zhì)中流體的流動(dòng)。

 

 

邏輯上可以假設(shè)認(rèn)為，粒徑大于過濾器孔徑的污染物質(zhì)可以很容易地通過機(jī)械過濾去除。這種機(jī)制也稱為篩選、濾除或尺寸排阻。 

 

不過，DNA或HCP之類的污染物的去除并非如此直觀。的另一種純化機(jī)制是吸附，也就是借助電動(dòng)力學(xué)或表面親和性吸附污染物。圖1中還顯示了中被吸附的顆粒。 

 

電荷修飾的介質(zhì)中表現(xiàn)出的電動(dòng)力學(xué)效果，可以去除亞微顆粒、膠質(zhì)物以及溶解的污染物。深層介質(zhì)的設(shè)計(jì)和制造中運(yùn)用了各種孔隙結(jié)構(gòu)和表面修飾。圖2 所示的是電荷修飾的深層介質(zhì)與非電荷修飾的介質(zhì)，在相同的條件下進(jìn)行測試的結(jié)果。

 

 

結(jié)果顯示，兩種過濾器在大顆粒的機(jī)械去除方面效果一致，但是電荷修飾的過濾器可以更為有效地通過吸附去除亞微顆粒。孔隙的表面化學(xué)在污染物的去除過程中同樣發(fā)揮了重要的作用。要發(fā)揮去除機(jī)制，需要選擇孔隙表面能小于污染物表面能的過濾器。這樣，污染物在降低表面能的驅(qū)動(dòng)之下，將結(jié)合至的孔隙表面，從而得以從液體流中去除。 

 

選擇*的，必須深入了解現(xiàn)有的商業(yè)化過濾器介質(zhì)。現(xiàn)有的介質(zhì)種類繁多，至少包括： 

 

* 用于去除負(fù)電荷物質(zhì)的正電荷修飾介質(zhì) 

* 具有特殊吸附特性的碳填充介質(zhì) 

* 用于去除脂質(zhì)的高硅氧介質(zhì) 

* 熱原敏感應(yīng)用中使用的低熱原性介質(zhì) 

 

的評估不具實(shí)際意義，因?yàn)闆]有一種標(biāo)準(zhǔn)的污染物可以用于評估所有的過濾器，并應(yīng)對細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)組成的復(fù)雜性。因此，每一項(xiàng)應(yīng)用必須測試幾種過濾器。 

過濾器優(yōu)化的主要目標(biāo)是讓過濾器的性能得到zui大化。在這方面，雙層產(chǎn)品在一個(gè)過濾器中具備了梯度的孔徑結(jié)構(gòu)。較大孔徑的過濾器置于上游，其后是較細(xì)孔徑的過濾器。較大的污染物被上游的過濾層所截留，而較小的顆粒則由下游的過濾層去除。因此尺寸分布較廣的污染物通過一個(gè)步驟就可以去除。 

 

設(shè)計(jì)過濾的順序，*步是判斷需要去除或減少的物質(zhì)，以及不需要去除的物質(zhì)。對工藝及/或產(chǎn)品進(jìn)行小規(guī)模的測試是非常重要的。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的許多案例中，需要對各種電荷修飾的深度介質(zhì)的孔徑進(jìn)行測試。為了檢測過濾器的有效性，在過濾之前需要記錄一些數(shù)據(jù)，例如總細(xì)胞密度、活力、濁度、滴度。在優(yōu)化過程中，需要監(jiān)控每一個(gè)過濾器的壓差、濾液的重量/體積、濾液的濁度，直至達(dá)到zui終的壓差。需要記錄合并濾液的濁度、滴度、DNA濃度以及HCP濃度，并進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量分析，從而決定*的過濾方案。 

 

對總細(xì)胞密度、活力以及濁度進(jìn)行審核是了解批次間差異的快速方法。過濾前和過濾后的滴度數(shù)據(jù)可以顯示是否有產(chǎn)品留在過濾器中。每一批濾液的濁度可以作為濾液質(zhì)量和有效性的指標(biāo)，并且應(yīng)當(dāng)進(jìn)行定性比較，尤其是下游使用了滅菌膜濾器的時(shí)候。 

 

如果濾液符合要求，那么隨后的步驟就是根據(jù)確定過濾序列的規(guī)模。通過分析壓降以及重量/體積數(shù)據(jù)，計(jì)算出通量并確定系統(tǒng)的規(guī)模。 

 

通量用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的值來表示，單位為體積/每個(gè)單位面積，通常記錄為升/平方米（L/m2）。過濾器的通量值可以用于判斷一定規(guī)模的過濾操作所需的過濾器的面積大小。 

 

例如，有1升液體需要使用25平方厘米的過濾器進(jìn)行過濾。實(shí)驗(yàn)完成之后，記錄為zui終壓降達(dá)到時(shí)過濾了0.85升（L）。 

 

隨后可以用該數(shù)據(jù)計(jì)算150升的批次所需的過濾表面，方法是用0.85L除以25cm2，得到0.034 L/cm2或340 L/m2。接下來，用目標(biāo)批次的體積150L除以通量值340 L/m2，得到所需的過濾器面積為0.44m2。 

 

過濾器的通量值取決于特定的流速，以及所測試的的級別/孔徑。如果在小規(guī)模測試中記錄的流速是7ml/min，則150L的批次可以使用流速進(jìn)行計(jì)算。方法是用流速7ml/min除以過濾器的面積25cm2，得到0.28 ml/cm2/min 或 168 LMH，這個(gè)單位就是經(jīng)常使用的“升每平方米每小時(shí)”。這個(gè)值可以用于計(jì)算任何規(guī)模的過濾操作的流速，方法是用過濾面積0.44m2乘以168 LMH（74.1 L/hr = 1.2 L/min）。需要注意的是，并不會(huì)總是得到所需面積0.44m2這個(gè)確切的值。應(yīng)當(dāng)重復(fù)計(jì)算可能的過濾器面積。使用模塊進(jìn)行設(shè)計(jì)，通常推薦進(jìn)行隨后的評估。 

 

這會(huì)使得過濾器面積過大，或需要使用安全系數(shù)，這是考慮到了潛在的工藝和批次間的差異。 

 

雖然每一種產(chǎn)品或工藝都是*的，不過一般而言下述說明是正確的： 

 

* 過濾器單位面積內(nèi)采用較低的流速，則過濾器性能更高（L/m2）。 

 

* 孔徑較小并且電荷較高的介質(zhì)可以更有效地去除DNA和HCP。 

 

* 細(xì)胞形態(tài)學(xué)、總細(xì)胞密度以及獲物的活力對過濾器的性能都會(huì)產(chǎn)生影響。 

 

* 如果使用帶正電荷的介質(zhì)，產(chǎn)品的等電點(diǎn)（pI）應(yīng)當(dāng)高于pH值，以獲得zui高的產(chǎn)品回量。 

 

* 滯留體積、可量測性、工效學(xué)以及易用性等因素會(huì)隨特定的供應(yīng)商而產(chǎn)生變動(dòng)，確定過濾工藝時(shí)也應(yīng)當(dāng)加以考慮。 

 

針對一種產(chǎn)品設(shè)定過濾工藝時(shí)需要考慮眾多的因素——滴度、濁度、DNA/HCP以及過濾器性能。通過完成中、小規(guī)模的測試，并更加深入了解深層過濾的性能，則可以獲得穩(wěn)定可靠的工藝，這樣的工藝中產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，放大后具有可靠的結(jié)果，并且縮短了工藝周期時(shí)間。 

 

有時(shí)候在放大過程中會(huì)出現(xiàn)問題，對于這樣的情況有相對簡單地解決方案。以下是一些例子： 

 

案例1：初次實(shí)驗(yàn)的成品率為98%，但是現(xiàn)在卻僅為接近90%。過濾介質(zhì)*一致，流速一致，產(chǎn)品/工藝也一致。這樣的差異如何解釋呢？ 

可能的解決方案：可能存在許多不同的根本原因，但是，很有可能與過濾器的預(yù)沖洗和后沖洗有關(guān)。基本上，產(chǎn)品可能沒有損失，只是被沖洗過濾器的緩沖液稀釋了。可以進(jìn)行質(zhì)量平衡實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證是否屬于此類狀況。 

 

案例2：在包括了兩個(gè)階段的過濾操作中，終點(diǎn)壓降看起來比預(yù)期到得要早。 

 

可能的解決方案：兩個(gè)過濾器的上游都是用壓力計(jì)，顯示系統(tǒng)的壓降，第二個(gè)過濾器上游的壓力計(jì)將顯示此過濾器的壓降，可以從系統(tǒng)壓降中減去第二個(gè)過濾器的壓降得出*個(gè)過濾器的壓降。有可能記錄的是系統(tǒng)的壓降，而不是*個(gè)過濾器的壓降。需要注意的是，每一家供應(yīng)商對zui大系統(tǒng)壓降以及單個(gè)過濾器的壓降都規(guī)定有具體的參數(shù)。 

 

案例3：計(jì)算過濾器的預(yù)清洗液數(shù)值時(shí)，這個(gè)值是供應(yīng)商規(guī)定值的100倍。 

 

可能的解決方案：單位換算時(shí)可能存在錯(cuò)誤。雖然1米等于100厘米，但是1平方米等于10,000平方厘米。關(guān)鍵在于檢查計(jì)算過程和單位換算，從而確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。